Utjecaj predanalitičkih i analitičkih značajki na klinički značaj srednjeg volumena trombocita (MPV)

Buttarello M, Mezzapelle G, Plebani M. Effect of preanalytical and analytical variables on the clinical utility of mean platelet volume. Clin Chem Lab Med 2018;56(5):718-725. (originalni članak)

Cilj istraživanja bio je analizirati učinak predanalitičkih (vrijeme, temperatura, antikoagulans) i analitičkih (nepreciznost, korelacija između volumena i koncentracije trombocita) značajki na srednji volumen trombocita (MPV). Daljnji cilj bio je izračunati referentne intervale za MPV i druge parametre vezane uz veličinu trombocita (PDW, P-LCR) u odrasloj populaciji. Analize su napravljene u duplikatu u 170 zdravih odraslih osoba oba spola (prema CLSI smjernicama C28-A3): i) unutar 30 minuta od uzorkovanja; ii) nakon 4 sata (uzorci su čuvani na sobnoj temperaturi).
Brojanje trombocita i određivanje trombocitnih indeksa određeni su na analizatoru Sysmex XE-5000 koristeći impedancijski kanal s hidrodinamičkim fokusiranjem. Preporučeni antikoagulans za kompletnu krvnu sliku je K2-EDTA. Zbog transformacija trombocita u kontaktu s EDTA, s vremenom MPV raste ukoliko su mjerenja izvedena impedancijom. MPV ovisi i o tipu analizatora jer ne postoji trenutno dostupna vanjska procjena kontrole, a bez univerzalnih referentnih materijala kalibracija je sljediva samo do kalibratora individualnog proizvođača.
Za procjenu stabilnosti tijekom vremena, određene su vrijednosti trombocitnih parametara 20 ispitanika, a ponovljene analize su napravljene u periodu od 24 sata na sobnoj temperaturi i 4˚C koristeći K2-EDTA ili Na-citrat kao antikoagulanse. Za procjenu nepreciznosti, tri uzorka s različitim vrijednostima MPV-a su analizirani 9 puta u različitim serijama s razmakom 15 minuta. Nepreciznost iz dana u dan procijenjena je upotrebom stabilnih komercijalnih kontrola analizirajući u 18 serija, 6 dana.
Rezultati: Nađena je nelinearna korelacija između MPV-a i broja trombocita. Gornje vrijednosti referentnog intervala za trombocite i trombokrit su veće kod žena, dok su vrijednosti MPV-a i P-LCR više kod muškaraca. Stabilnost MPV-a (i P-LCR) usko ovisi o korištenom antikoagulansu, vremenu proteklom od uzorkovanja do analize i temperaturi skladištenja uzoraka. MPV u Na-citratu niži je nego u K2-EDTA. Za K2-EDTA najbolji uvjeti za skladištenje su sobna temperatura. Skladištenje na 4 ˚C osigurava stabilnost između 1 i 4 sata. CV za nepreciznosti s različitim vrijednostima MPV-a iznosi 0,8%, dok je CV za nepreciznost iz dana u dan 0,6%.
Interpretacija rezultata mora biti podređena referentnom rasponu i postavljenim graničnim vrijednostima hematoloških analizatora. Korištenje različitih analizatora vodi do varijacija u rezultatima što sprječava pouzdanu usporedbu rezultata. Specifičnost MPV-a generalno je vrlo mala, a povećani MPV nalazi se u gotovo svim klinički stanjima.

Pripremila: Marina Boćan, Poliklinika Salzer

Učestalost pojave eritrocita oblika ribe u različitim hematološkim poremećajima

The frequency of occurrence of fish-shaped red blood cells in different haematologic disorders. Robier C, Körber C, Quehenberger F, Neubauer M, Wölfler A. Clin Chem Lab Med 2018;56(2):323-326. (originalni članak)

Crvene krvne stanice (engl. red blood cells, RBP) koje nalikuju obrisu ribe, rijetko se mogu uočiti u razmazima periferne krvi. Takve stanice slične su dakrocitima (eritrocitima oblika suze) u kojih je jedan kraj stanice ovalan, a drugi zašiljen. Za razliku od poikilocita oblika suze, u eritrocitima oblika ribe zašiljeni kraj se račva na dva dijela te nalikuje na riblji rep. Ispitivana je učestalost eritrocita oblika ribe u različitim hematološkim poremećajima kako bi se otkrila potencijalna povezanost sa specifičnim poremećajima. Eritrociti oblika ribe bilježeni su kao broj stanica na 20 vidnih polja pri mikroskopskom povećanju od 1000 puta. Razmazi koji su sadržavali ≥ 1 eritrocita oblika ribe/20 vidnih polja označeni su kao pozitivni.
U razmazima zdrave kontrolne skupine nisu uočeni eritrociti oblika ribe, stoga bi pojavnost takvih poikilocita mogla upućivati na patološko stanje. Eritrociti oblika ribe u značajnoj mjeri su uočeni u razmazima bolesnika s nasljednom eliptocitozom, sideropeničnom anemijom, deficijencijom vitamina B12 i folata, anemijom uslijed jetrene bolesti i primarnom mijelofibrozom. Najveći broj eritrocita oblika ribe zabilježen je u bolesnika s nasljednom eliptocitozom i deficijencijom vitamina B12 i folata. U bolesnika s mijelodisplastičnim sindromom, β-talasemijom minor, akutnom mijeloičnom leukemijom i kroničnom mijelomonocitnom leukemijom samo se povremeno može uočiti ovakav oblik eritrocita. Uočena je i statistički značajna negativna korelacija hemoglobina, kao pokazatelja težine anemije, i pojavnosti eritrocita oblika ribe (p<0,014), stoga bi prisutnost eritrocita oblika ribe mogla ukazivati na teži stadij anemije.

Pripremila: Jelena Buben, 5. godina studija medicinske biokemije, Farmaceutsko-biokemijski Fakultet

Utjecaj citratnog antikoagulansa na morfologiju eritrocita i koncentraciju glukoze u plazmi

Lunt H, Heenan HF, Edwards P, Florkowski CM. Impact of citrated blood collection tubes on red cell morphology: implications for the measurement of plasma glucose. Clin Chem Lab Med 2018;56(4):97-98. (pismo uredniku)

Citratni antikoagulans ima stabilizirajući učinak na koncentraciju glukoze u plazmi. Snižavanjem pH uzorka krvi ispod 7 dolazi do inhibicije aktivnosti nekoliko enzima Emden-Meyerhofovog puta. Općenito vrijedi da su vrijednosti koncentracije glukoze u plazmi u spremnicima s citratom veće u odnosu na vrijednosti u spremnicima s fluoridom. U ranije objavljenom radu naglašen je klinički značaj čak i malih razlika u izmjerenim koncentracijama glukoze u plazmi, uzrokovanih upotrebom spremnika s citratnim antikoagulansom od različitih proizvođača. Mehanizam koji dovodi do spomenutih razlika nije poznat.
Terumo VenosafeTM spremnicima postiže se pH uzorka krvi između 5,3 i 5,9. Brojni radovi ističu da zakiseljavanje uzorka pune krvi do navedenog pH raspona dovodi do promjena u morfologiji eritrocita. Ispitan je utjecaj Terumo VenosafeTM spremnika na morfologiju eritrocita prikupljanjem uzoraka krvi u 1) spremnike s EDTA i 2) Terumo VenosafeTM spremnike odmah nakon venepunkcije i 24 sata kasnije. U uzorcima krvi u Terumo VenosafeTM spremnicima uočene su promjene u veličini i morfologiji eritrocita. Pretpostavlja se da je promjena stanične morfologije uzrokovana sniženjem pH posljedica pomaka tekućine iz plazme u stanice što se očituje porastom vrijednosti MCV-a (engl. mean corpuscular volume) i hematokrita. Pomak tekućine utječe na relativnu koncentraciju unutarstaničnih i izvanstaničnih analita, primjerice, ulaskom izvanstanične tekućine u stanice dolazi do prividnog porasta koncentracije glukoze u plazmi. Sniženje pH uzorka krvi dovodi i do povećanja vrijednosti MPV-a (engl. mean platelet volume).
Zaključno, učinak sniženja pH u spremnicima različitih proizvođača može rezultirati razlikama u pomaku intra- i ekstracelularne tekućine, stoga i različitim vrijednostima koncentracija glukoze u plazmi.

Pripremila: Marija Brčić, KBC Sestre milosrdnice, Zagreb

Koncentracije IL8 i IL16 kao indikatori kvalitete uzoraka seruma i plazme

Kofanova O, Henry E, Quesada RA, Bulla A, Navarro Linares H, Lescuyer P, Shea K, Stone M, Tybring G, Bellora C, Betsou F. IL8 and IL16 levels indicate serum and plasma quality. Clin Chem Lab Med 2018; 56(7):1054-1062. (originalni članak)

Za uzorke seruma i plazme neki od najkritičnijih predanalitičkih čimbenika su vrsta spremnika za uzorkovanje te vrijeme proteklo od uzorkovanja do centrifugiranja, te temperatura na kojoj su uzorci bili pohranjeni prije centrifugiranja. Za uzorke za koje nisu poznati ovi predanalitički čimbenici bilo bi poželjno imati analizu kojom bi mogli retrospektivno procijeniti kvalitetu uzorka. Do danas nije bila poznata analiza kojom bi se utvrdila kvaliteta uzorka koji je prije centrifugiranja stajao 24 do 48h. Kao indikatori kvalitete uzorka u ovom istraživanju odabrani su IL16 i IL8.
Uzorci seruma i plazme zdravih ispitanika korišteni su iz Integrated Biobank of Luxembourg (IBBL), Biobank of the Geneva University Hospital , San Francisco Blood System Research Institute (BSRI) i Karolinska Institute Biobank. Serum i plazma bolesnika s reumatoidnim artritisom (RA) korišteni su uzorci iz Precision for Medicine (Fredrick, MD, USA), uzorci plazme HIV pozitivnih pacijenata korišteni su iz BSSPA Biobank , te uzorci seruma i plazme pacijenata s akutnim pankreatitisom i RA korišteni su iz EastWeatBio (Ukrajina). IL8 određivan je u svim uzorcima seruma i plazme koristeći R&D system kit “Human IL-8/CXCL8 Quantikine ELISA kit“, a IL16 je određivan u svim uzorcima EDTA plazme koristeći R&D system kit “Human IL-16 Quantikine ELISA kit“. Uzorci bolesnika s RA, akutnim pankreatitisom i HIV-om uzeti su u razmatranja jer su to stanja povezana s visokim koncentracijama IL16, odnosno IL8, te se željelo ispitati hoće li to utjecati na procjenu kvalitete uzorka.
Kako bi se odredili najpovoljniji indikatori kvalitete uzorka kod tri ispitanika napravljena je analiza 20 prouplanih čimbenika/citokina u uzorcima seruma i plazme. Utvrđeno je da IL8 pokazuje najveći postotak porasta u uzorcima seruma i citratne plazme obzirom na uvjete pohrane uzorka prije centrifugiranja, a IL16 pokazuje najveći postotak porasta u uzorcima EDTA plazme.
Rezultati istraživanja su pokazala da ukoliko stajanje uzoraka na sobnoj temperaturi nakon centrifugiranja nema utjecaj na koncentraciju IL16, te se IL 16 jednako kao i IL8 mogu koristiti kao indikatori kvalitete uzorka i za uzorke koji su centrifugirani, a kako bi se retrogradno procijenilo jesu li uzorci prije centrifugiranja stajali ≥ 24 h, odnosno ≥ 48 h na sobnoj temperaturi.

Pripremila: Marija Božović, KBC Sestre milosrdnice, Zagreb